Rol' retseptora tsitokinov gp130 v gemopoeze

Abstract

В течение последних 5 лет открыт и интенсивно изучается метод размножения гемопоэтических стволовых клеток-предшественников человека с помощью прямого воздействия на gp 130 - трансдуцерную молекулу цитокинов семейства ИЛ-6. Преимуществом данного подхода является его высокая эффективность и возможность действовать на клетки, не экспрессирующие а-цепи ИЛ-6-цитокинов. Обычно для целей активации гемопоэтических предшественников и стволовых клеток через gp 130 используется комплекс ИЛ-б/эИЛ-бР. Метод позволяет стимулировать пролиферацию примитивных стволовых клеток (LTC-IC), мультипотентных (КОЕ-ГЕММ), эритроидных (БОЕ-Э) и мегакариоцитарных клеток-предшественников. Размноженные таким способом клетки сохраняют хорошую репопулирующую способность. Представляет большой практический интерес изучение бесцитокиновой активации gpl30 на гемопоэтических предшественниках с помощью пар aHTH-gpl30 МКА. Таким образом, прямое воздействие на трансдуцерную молекулу gpl30 позволяет проводить эффективное размножение функционально полноценных стволовых гемопоэтических клеток человека ex vivo.

Full Text

Рансплантация стволовых гемопоэтических клеток и клеток- предшественников (CD 34+) стала рутинным методом лечения онкологических больных, направленным на восстановление кроветворения после высокодозной химиотерапии. Недостаток в трансплантате С 034 +-клеток является ограничение м метода, в особенност и у онкогематологических больных, у которых гемо- поэз нарушен многократ ными курсами полихимиотерапии. Преодолеть это ограничение возможно, размножив С 034 +-клетки трансплантата вне организма больног о (ex vivo). В настоящее время подобна я стратегия ш ирок о применяетс я и ведется активный поиск путей повышения ее эффективности. Рецепторный комплекс интерлейкина 6 (ИЛ-6) участвует в регуляции пролиферации и ди фф еренцировк и гемопоэтических клеток-предшественников человека. Этот комплекс состоит из двух полипептидных цепей: а-цепь - это собственно рецептор ИЛ-6 (ИЛ-6Р, gp80, CD 126), (3-цепь или gp l 3 0 (CD 130) - это трансдуцер цитокиновог о сигнала внутрь клетки [1]. ИЛ-6 является синергистом ИЛ-3 и стволовоклеточног о фактора (СФ) в усилении пролиферации гемопоэтических предшественников человека, а у мышей поддерживае т колониеобразова - ние из покоящихся гемопоэтических предшественников и их вхождение в G l- ф азу клеточног о цикла [2, 3, 4]. Роль прямой активации gp l 30 в гемопоэзе установлена лишь в самые последние годы [5]. В онтогенез е и по мере ди фф еренцировк и гемопоэтических клеток в организме взрослог о человека экспрессия а- и (3-цепей рецептора ИЛ-6 происходит последовательно: сначала на мембране клеток появляются (3-цепи, а затем - a-цепи. (З-Цепи или gp l 3 0 экспрессированы на всех гемопоэтических клетках-предшественниках, а a-цепи экспрессированы на различной пропорци и С 034+-клеток: 30-50% клеток пуповинной крови, 80% клеток периферической крови [6]. Во ф ракции ИЛ-6Р+ С 034 +-клеток сосредоточены в основном коммитированн ые миелоидн ые предшественники, и добавление ИЛ-6 к культурам стволовых клеток ведет к увеличению численност и колониеобразующ их единиц гранулоцитарно- макрофагальног о ряда (КОЕ-ГМ). Во ф ракции CD 34+ ИЛ-бР- сосредоточены примитивные стволовые клетки- предшественники или, как их иначе называют, клетки, инициирующие длительные культуры (LTC-IC, long-term culture initiating cells). Кроме того, в этой ф ракции присутствуют клетки, дающие рос т с м е ш анн ы х (гранулоцитарны х-эритроидн ы х- м акро ф а - гальных- мегакариоцитарн ы х) колоний (КОЕ-ГЕММ), а также эритроидн ы е бурст-образующие единицы (БОЕ-Э) и мегакарио- цитарные КОЕ. Воздействие на CD34+ИЛ-6Р-клетки ИЛ-6 не вызывает их пролиферации и ди фф еренцировки. В последние годы применительно к рецепторному комплексу ИЛ-6 открыто новое явление - транссигналинг [7]. В нормальных условиях процесс передачи сигнала ИЛ-6 через мембранн ы й рецептор внутрь клетки осуществляется в несколько этапов: 1) связывание ИЛ-6 с мембранным рецептором; 2) присоединение комплекса ИЛ-6/ИЛ-6Р к молекуле gp l 30; 3) ковалентная димери- зация gpl 30 и изменение его эпитопной структуры [8]. Только после димеризации gp l 3 0 запускается каскад внутриклеточног о ф ос ф орилирования JAK/STAT. П омимо м ембранной ф ормы ИЛ-бР существует растворима я ф орма ИЛ-бР (sRJl-6P; s - от soluble), присутствующая в норме в сыворотке крови человека в концентрация х 50-80 нг/мл. Эта растворимая ф орма образуется за счет шеддинга (слущивания) мембранног о ИЛ-бР или альтернативног о сплайсинг а мРНК ИЛ-бР. Растворимая ф орма рецептора связывается с ИЛ-6 с тем же аффинитетом, что и мембранн ые ИЛ-бР. Комплекс ИЛ-б/зИЛ-бР способе н взаимодействоват ь с gp l 3 0 на клетках и активироват ь их пролиферацию и дифференцировку . Таким образом, открывается уникальная возможность активации даже тех клеток, которые не экспрессируют ИЛ-бР Это явление получило название "транссигналинг". Решающее значение в понимани и роли gp l 3 0 в гемопоэзе in vivo сыграли эксперименты на трансгенных мышах. У мышей, трансгенных по sKT-6P человека, не развивается специ фический для трансгена фенотип, так как эндогенн ый мышиный ИЛ-6 не взаимодействует с sHT-6P человека. У дважды трансгенных мышей (по ИЛ-6 и sHJI-бР человека) развиваются весьма характерные нарушения гемопоэза во взрослом возрасте: массивный экстрамедуллярный гемопоэз в печени и селезенке [9]. В этих органах присутствуют повыш енн ы е количества Lin-/Sca-l+/c-kit+ клеток, которые содержат очень высокий процент гемопоэтических стволовых клеток [10, 11]. Кроме того, в печени и селезенке резко увеличено число гранулоцитов, макрофагов, Sca-1+ гемопоэтических клеток-предшественников и В-клеток. Присутствие гемопоэтических клеток-предшественников в печени и селезенке приводит к нарастающему со временем массивному увеличению числа лейкоцитов, нейтрофилов, тро мбоцитов и эритроцитов в периферической крови у дважды трансгенных мышей. Эти проявления полностью отсутствуют у мышей, трансгенных только по sKJI-бР, И у контрольных животных [9]. В эмбриогенезе мышей первые гемопоэтические клетки возникают в желточном мешке на 7,5 день внутриутробног о развития. Первой эмбриональной тканью с мультилинейной и длительно репопулирую- щей активностью является область спланхно-плевральной мезодермы/аорты, генитального тяжа, м езонеф роса (область AGM) между 8,5 и 11-м днем внутриутробног о развития [12]. Далее гемопоэтические предшественники и стволовые клетки могут быть обнаружены в печени плода, а в периоде близком к рождению - в селезенке и костном мозге. Иными словами, у дважды трансгенных мышей возобновляется эмбриональный гемопоэз, имеющ ий место после 11-го дня внутриутробног о развития. Гемопоэз в костном мозге у дважды трансгенных мышей не повреждается присутствием ИЛ-6 и s ИЛ-бР [9]. Это свидетельствует о различном влиянии на гемопоэтические ткани комплекса ИЛ-б/зИЛ-бР Дополнительным подтверждение м важности §р130-регуляции гемопоэза именно в эмбриональном периоде являются опыты на gp l 30- HOK ayT H b i x мышах (gpl 30"/"). Эти животные нежизнеспособны. Смерть наступает до рождения после 12,5 дня внутриутробног о развития. У мутантных эмбрионо в сниж ено количество полипотентных и коммитированн ы х гемопоэтических предшественников в печени, а также Т-клеток в тимусе [13]. Мыши, нока- утные по гену ИЛ-6, являются жизнеспособными и не имеют подобных гематологических нарушений. Роль прямо й стимуляции пролиферации in vitro гемопоэтических клеток-предшественников человека через молекулу gp l 3 0 доказана в работ е X.Sui и соавт. [5]. П ри культивировании стволовых (CD 34+) клеток пуповинной крови в полужидких средах в присутствии СФ и комплекса ИЛ-б/вИЛ-бР резко увеличивается количество колониеобразующ их единиц и изменяется их качественный состав: появляются многочисле нные колонии крупного размера, более 60% которы х относится к ГЕММ и бластным колониям, возрастает число м егакариоцитарн ы х колони й и БОЕ-Э. ИЛ-3, гранулоцитарно- макрофагальный колониестиму - лирующ ий ф актор (ГМ-КСФ) и гранулоцитарный колониести- мулирующий ф актор (Г-КСФ), напротив, ведут к ф ормировани ю , главным образом, КОЕ-ГМ. Растворимая ф орма ИЛ-бР дозозави- симо стимулирует возрастание численност и КОЕ (вплоть до 70- кратного) в суспензионн ых культурах С 034 +-клеток, выращиваемых в присутствии ИЛ-6 и СФ. М оноклональны е антитела (МКА) к gp l 3 0 и ИЛ-бР э фф ективно блокируют колониеобразо- вание, индуцированно е комплексом ИЛ-б/вИЛ-бР, оказывая наибольшее влияние на смеш анн ые колонии. Эти МКА не влияют на колонии, образуемые под действием СФ и ИЛ-3. Эти данн ы е убедительно доказывают важную роль трансдукции сигнала через gp 130 пр и генерации in vitro гемопоэтических клеток-предшественников человека. Одним из уникальных, еще не до конца изученных и понятых ф ено м енов, касающихся стволовых гемопоэтических клеток, является изменение их чувствительност и к ростовым ф актора м или цитокина м в онтогенезе. Существуют различия в ответах клеток-предшественников плода и взрослых на цитокины. Гемо- поэтические стволовые клетки и предш ественники из тканей плода и новорожденных имеют больш ий пролиферативный потенциа л в сравнении с клетками костног о мозга взрослых. CD 34- позитивные клетки человека, полученные из различны х источников ( пуповинной крови, костног о мозга взрослых), по-разному отвечают на стимуляцию gp l 30 . Комплекс ИЛ-б/БИЛ-бР способен стимулироват ь клетки пуповинной крови, ф ормиру ющ и е эритроидн ы е и смеш анн ы е колонии, но не влияет на образовани е миелоидн ы х колоний. П ри стимуляции СЭ 34+-клеток костного мозга этим комплексом возрастало число КОЕ-ГМ и БОЕ-Э. Важной особенность ю действия HJI-6/sHJI-6P является способность стимулироват ь пролиферацию наиболе е примитивных стволовых клеток (LTC-IC) пуповинно й крови, но ИЛ-б/БИЛ-бР не стимулирует пролиферацию аналогичн ых клеток костног о мозга [14]. Обобщая эти данные, можн о отметить, что, несмотря на экспрессию gp l 30 , на всех гемопоэтических клетках-предшественниках активация gp l 3 0 с помощ ью комплекса ИЛ-б/эИЛ-бР происходит лишь на определенных клеточных типах. П ричины различног о влияния HJI-6/sHJI-6P на gp 130-позитивные клетки до конца не установлены. Очевидно, что в случаях отсутствия экспрессии на клетках ИЛ-6Р gp l 3 0 является адекватной мишенью для клеточной активации. Убедительны и данные о том, что в случаях гиперэкспрессии а-цепей рецепторов семейства ИЛ-6 на клетках воздействие на эти клетки комплекса цитокина с растворим ы м рецептором может вести к ингибиции gp 130-сигнала за счет ф ормирования мономеров а/|3-цепей, как это показано в случаях рецептора для ИЛ-11 [15]. M.Peters и соавт. [7] предполагают, что комплекс ИЛ-б/вИЛ-бР не оказывает стимулирующего или ингибирующего действия на клетки, экспрессирующ ие на мембране gp l 30 и ИЛ-бР в примерно равных количествах. Однако это находится в определенном противоречии с данн ым и J.-P.Gaillard и соавт. [16], полученными на линия х ИЛ-6-зависимых миеломных клеток. Очевидно, что этот вопрос нуждается в дальнейшем изучении. Следовательно, пролиферацию гемопоэтических клеток-предшественников можн о модулироват ь воздействием на рецептор- ный комплекс ИЛ-6. П рямое воздействие ИЛ-6 способствует размножению ИЛ-6Р+ клеток (КОЕ-ГМ пуповинной крови). Воздействие комплекса ИЛ-б/эИЛ-бР стимулирует примитивные стволовые клетки (LTC-IC), КОЕ-ГЕММ, БОЕ-Э пуповинной крови, а также миелоидн ых и эритроидн ы х предшественников костног о мозга взрослых людей. Единственным типом гемопоэтических клеток-предшественников, которые не подвержены регуляции через gpl 30 , являются примитивные стволовые клетки костног о мозга (LTC-IC). Для стимуляции этих клеток оптимальным является применение смеси трех факторов: лиганда Flk2/Flt3 (F1), стволовоклеточ- ного фактора или лиганда рецептора c-kit (СФ), а также ИЛ-3 [17]. Та же комбинация цитокинов оптимальна и для размножения непосредственных колониеобразующ их клеток костног о мозга, приче м в этом случае дополнительное введение ИЛ-6 в культуру повыш ало э фф ективност ь колониеобразования в 4 - 8 раз. Очень интересным оказался факт влияния на примитивные стволовые клетки (LTC-IC) тро мбопоэтина (ТРО). Этот ф актор не только достоверно увеличивал количество LTC-IC, но и вызывал перераспределение типов колониеобразующ их единиц, возникающих из этих клеток. Если в условиях культивирования стволовых клеток без добавления ростовых ф акторов или в присутствии комбинации FL+СФ+ИЛ-З не менее 97% колоний были грану- лоцитарно- макрофагальными, то в случае добавления ТРО происходил существенный сдвиг в сторону образования эритроидных колоний. Следовательно, добавление ростовых ф акторов пр и культивировании LTC-IC позволяет не только увеличиват ь количество этих клеток, но и изменят ь их качественный состав. В этой связи важно отметить, что тро мбопоэтин может быть заменен комплексом ИЛ-б/эИЛ-бР [18]. П ри выращ ивании стволовых клеток/клеток-предшественников (CD 34+) человека в бессывороточн ых суспензионн ых культурах в присутствии ИЛ-6 и СФ добавление sKJI-бР дозозависимо увеличивало генерацию ме- гакариоцитов (ИЬ/Ша+ клеток). Комплекс ИЛ-б/эИЛ-бР был также синергистом ИЛ-3 и ТРО в генерации мегакариоцитов из CD34+ клеток, а ИЛ-6 подобным действием не обладал. В метил- целлю лозн ы х культурах использование комбинаци и СФ + ИЛ-б/БИЛ-бР приводило к образованию значительного числа ме- гакариоцитар ных колоний, что пр и отсутствии бИЛ-6Р не наблюдалось. М егакариоцитопоэ з зависел от передачи сигнала через gp 130 и не зависел от ТРО, так как полность ю блокировался анти- gp 130 МКА, но не блокировался антителами к ТРО. Клетки-предшественники мегакариоцитов входили в состав ИЛ-бР- ф ракции CD 34+-K/ieTOK. До недавнего времени считалось, что единственн ым гуморальным регулятором эритропоэз а является эритропоэтин (ЕРО). Японские ученые установили, что стимуляция gp 130 с помощ ью комплекса ИЛ-б/эИЛ-бР способна поддерживат ь пролиферацию , дифф еренцировку и конечное созревание эритроидн ы х клеток из очищ енн ы х С 034 +-клеток человека в присутствии СФ. Это действие отменяется антителами к gp l 30 . Все эти три фактора (СФ, ИЛ-6 и эИЛ-бР) присутствуют в достаточных количествах в сыворотке крови человека, и, следовательно, регуляция эритропоэза через молекулу gp l 30 in vivo также может иметь место [19]. Под действием сигналов, передаваемых через c-kit, gp 130 и рецептор ИЛ-3, CD 34+HT-6P- клетки крови способны генерировать предшественников, дифф еренциру ющ ихся по трем росткам ге- мопоэза: гранулоцитарному, эритроидно м у и мегакариоцитар- ному. В этом случае активация gp l 3 0 также достигается с помощью комплекса ИЛ-б/эИЛ-бР и отменяется с помощ ью МКА к gp l 3 0 [20]. Вопросы активации пролиферации и ди фф еренцировк и гемопоэтических клеток через gp l 3 0 имеют как фундаментальное, так и прикладное значение. В прикладном аспекте важен факт возможности использования комплекса ИЛ-б/эИЛ-бР для размножения стволовых клеток ex vivo в случаях проведения аутоло- гичной или аллогенной трансплантации. По этим причина м важны не только количество вводимых С 034+-клеток, их мультили- нейный ди фф еренцировочн ы й потенциал, но и способност ь ре- популироват ь гемопоэтические органы и приживаться в организме реципиента . В опытах на мышах NOD/SCID показано, что CD34+-K/ieTKH пуповинной крови человека, размнож енн ы е in vitro применение м смеси 4 факторов (СФ, F1, ТРО, ИЛ-б/эИЛ-бР), эфф ективно приживалис ь и репопулировали костный мозг животных. Добавление ИЛ-3 отменяло способност ь размнож енн ы х клеток к репопуляции [21]. Следовательно, комплекс ИЛ-б/эИЛ- 6 Р перспективе н для размно ж ения гемопоэтических клеток- предшественников in vitro в целях их последующей трансплантаци и больным. Открытие путей активации роста стволовых клеток воздействием на gp l 3 0 комплекса ИЛ-б/эИЛ-бР побудило к оптимизации этого подхода и его стандартизации. Одна из причи н "неудобства" работ ы с комплексом состоит в необходимости использования 50-кратног о избытка концентрации SLL4-6P над ИЛ-6 (> 1000 нг/мл против 50 нг/мл). Это обусловлено тем, что время распада комплекса ИЛ-б/зИЛ-бР меньше, чем время, необходимое для соединения этого комплекса с gp l 30 . Апробированы различные способы повышения стабильност и комплекса. Один из подходов состоит в том, что ИЛ-6 и эИЛ-бР ковалентно связываются в единую молекулу. Такая молекула получила название "Гипер-ИЛ-6". Гипер-ИЛ-6 обладал активность ю , свойственной комплекс у ИЛ-б/эИЛ-бР в отнош ении gp 130-экспрессиру ющих клеток, причем действующая концентрация была в 100-1000 раз более низкой, чем используемая концентрация цитокина и растворимог о рецептора. Гипер-ИЛ-6 эфф ективно стимулировал размнож ение гемопоэтических клеток-предшественников in vitro в концентрациях в 100 раз более низких, чем таковые для ИЛ-6 и эИЛ-бР [22, 23]. Вместе с тем Гипер-ИЛ-6 (в сочетании с FL + ТРО) был в 2-4 раза более слабым стимулятором LTC-IC в сравнении с ИЛ-6 [24]. Поскольку объяснит ь подобное наблю дение прямым воздействием ИЛ-6 на примитивных гемопоэтических предшественников не представляется возможным (на ни х отсутствует ИЛ-бР), то, по-видимому, ИЛ-6 более э фф ективно воздействовал на акцессорн ы е клетки. Установлено мощно е синергидное действие Ги- пер-ИЛ-6 с FL и ТРО вне зависи мости от присутствия в среде культивирования СФ. Гипер-ИЛ-6 действовал на ИЛ-6Р+ и на ИЛ- 6Р- клетки-предшественники, способствуя их вы раж енной проли ф ерации, в то время как СФ стимулировал клеточную ди фф е - ренцировку. Таким образом, в настоящ ее время накопле н больш ой экспериментальный материал, свидетельствующий о важной рол и gp l 30 в регуляции пролифераци и и ди фф еренцировк и гемопоэтических клеток-предшественников от примитивных до линейно ком- ми тирова нных . Эта молекула способна включать программы эритроидной, миелоидной, м егакариоцитарной и мультилиней- но й ди фф еренцировки. Уникальност ь ситуации состоит в том, что воздействием на (З-цепь (g p l 30 ) рецепторног о комплекс а ИЛ-6 можн о заменит ь целый набо р линейно специ фи чн ы х ди ф - ф еренцировочн ы х ф акторов (Г-КСФ, тро мбопоэтин, эритропоэ - ти н и др.) - ф ено м ен, не имевш ий прецедент а за всю предшествующую историю гематологии. Каким образом, воздействуя на одну мембранну ю молекулу, можн о воспроизвест и целый каскад специ фи ческих сигналов, еще предстоит уточнить. По-видимому, речь идет о вы раж енной гетероге нности пула CD 34+ CD 130+ CD 126- клеток и об особенностях внутриклеточной передачи сигнала, опосредованног о gp 130, в клетках, находящ ихся на различн ы х стадиях онтогенез а и/или ди фф еренцировки. Не вдаваясь в детали молекулярных процессов gp 130-сигналинга, можн о констатировать , что путем активации gp l 3 0 можн о вне организма больног о (ex vivo) размножить практически все типы трансплантируемых клеток-предшественников гемопоэза, необходимые для быстрого и полног о восстановления кроветворения. Это особенно важно у больных, у которы х мобилизация стволовых клеток крови по тем или иным причина м оказывается неэффективной. Б есцитокинова я активаци я цитокинов ы х рецепторо в Как было отмечено в предыдущем разделе, моноклональн ы е антитела, блокирующ ие ди м еризацию gp 130, полность ю отменяют стимулирующее пролифераци ю и ди фф еренцировк у стволовых клеток крови действие комплекса ИЛ-б/эИЛ-бР. Это один из примеро в того, как на уровне gp l 3 0 можн о отменит ь сигнал практически лю бого цитокина семейства ИЛ-6. Детально данн ы й вопрос изучен на клетках множественной миеломы [25, 26]. Следовательно, существуют антитела-блокаторы сигнала gp 130. А существуют ли антитела-активаторы gp l 30 ? Впервые J.W ijdenes и соавт. [27] представили данн ы е о том, что МКА B-S12 способны стимулироват ь gp l 3 0 и вызывать пролифераци ю клеток, в том числе образующ их гемопоэтические колонии. В последующем пр и анализ е 37 МКА против gp l 3 0 существование антител-активаторов не было подтверждено, стимулирующими были только пары МКА [28]. В наш ей совместной работ е с ф ранцузскими ученым и было убедительно подтверждено, что пары МКА к gp l 3 0 способны стимулироват ь клеточную пролиферацию , вызывая ди м еризацию gp l 30 и активацию STAT3, так ж е как естественный цитокин ИЛ-6. Более того, было доказано, что МКА B-S12 в действительност и представляет собой смесь двух антител [29]. Для бесцитокиновой активации gp l 3 0 необходимо связывани е двух сайтов трансдуцера - одног о в област и дим еризации, другого в области присоединения ИЛ-бР [29]. Н аиболее активными парами МКА являются B1+ I2, B1+F1 , B 2 + I1 (согласно терминологии INSERM U 475) и некотор ы е другие. Эти МКА способны заменять ИЛ-6 и поддерживат ь рост ИЛ-6-зависимых ми ело мны х клеточных лини й как in vitro, так и in vivo на мыш ах SCID. Получена лини я миеломных клеток, рос т которой полность ю зависит от активации gp l 3 0 с помо щ ью МКА B1+I2 (XG-2PA). МКА способны заменять комплекс ИЛ-б/эИЛ-бР в поддержании роста мыш ино й пре-В-клеточной лини и BAF130, тра нсфицированно й с ДНК gp l 3 0 человека. Таким образом, стимулирующие МКА способны активироват ь как gp l 30 +™ -6 P+ - m i eT K H человека ( мие- ломны е клетки), так и gp l 30 +P W -6 P - i o i eT K H (BAF130). Следовательно, есть все основания полагать, что эти МКА могут оказаться э фф ективн ым и и в отно ш ени и стволовых гемопоэтических клеток человека, вне зависи мости от того, экспрессирова н на ни х ИЛ-бР или нет. Этот вопрос нуждается в экспери м ентальной проверке, так как перспективы использования стимулирующих пар a H T H -gp l 3 0 МКА для размно ж ения ex vivo гемопоэтических клеток-пред ш ественников представляются весьма заманчив ым и в силу того, что это более дешевый и более удобный для применени я продукт, чем комплекс ИЛ-б/эИЛ-бР. Р ез юм е В тече ни е последних 5 лет откры т и интенсивно изучается метод размнож ения гемопоэтических стволовых клеток-предшественников человека с помо щ ью прямог о воздействия на gp 130 - трансдуцерну ю молекулу цитокино в семейства ИЛ-6. Преимуществом данног о подхода является его высокая эфф ективност ь и возможность действоват ь на клетки, не экспрессиру ющ ие а-цепи ИЛ-6-цитоки нов. О б ы чн о для целей активации гемопоэтических предш ественников и стволовых клеток через gp 130 используется комплекс ИЛ-б/эИЛ-бР. Метод позволяет стимулироват ь пролиф ераци ю примитивных стволовых клеток (LTC-IC), мультипо- тен тны х (КОЕ-ГЕММ), эритроидн ы х (БОЕ-Э) и мегакариоцитар- ных клеток-предшественников. Размноженн ы е таким способом клетки сохраня ю т хоро ш у ю репопулирующ ую способность . Представляет больш ой практический интере с изучение бесцитокиново й активации gp l 3 0 на гемопоэтических предшественниках с помо щ ью пар a H T H -gp l 3 0 МКА. Таким образом, прямо е воздействие на трансдуцерну ю молекулу gp l 3 0 позволяет проводить э фф ективное размно ж ение ф ункционально полноценных стволовых гемопоэтических клеток человека ex vivo.